NY∕T 3641-2020 欧洲甜樱桃品种鉴定SSR分子标记法(农业)
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ID： |
334069BCDC6F4DD2A916C76E1DE539F1 |
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文件大小(MB)： |
0.7 |
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页数： |
15 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-24 |
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ICS 65.020.01,B 05 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3641 一2020,欧洲甜樱桃品种鉴定SSR分子标记法,Identification of sweet cherry varieties using SSR marker method,2020 - 07 - 27 发布2020 - 11-01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,NY / T 3641-2020,目次,前言…… …… . …… "…….. .…. .……… ..……..…"… … [1,l 范围…,2 规范性引用文伺,3 术语和定义,4 仪器设备及试剂,5 溶液配制,6 引物相关信息及使用…. .. .,7 参照品种及使用…,8 操作程序,9 数据记录与统计…… … … . .……………. . . .. .. . .. 3,10 判定方法……….. .,附录A (规范性附录) 仪都设备及试剂…,附录B (规范性附录) 溶液配制…,附录C(规范性附录) 核心寻 物名单及序列,附录O( 资料性IIH录〕核心引物相关信息…. 晻?..….. .?..厖厱?.. 9,T,NY/ T 3641-2020,11,本标准由全国植物新品种测试标准化技术委员会(SAC/ TC 2 77)归口.,本标准起草单位: 中国农业科学院郑州果树研究所.,木标准主要起草人: 李明、文IJ 聪利、齐希梁、李玉红、宋跟踪.,NY /T 3641 - 2020,甜樱桃品种鉴定SSR 分子标记法,范围,本标1(1年规定了利用简单重复序列( Simpl c scqucncc rcpcat. SSR ) 标记的遗传多态性进行欧洲甜樱桃,( Pru 川LS Cl vium L. )品种鉴定的操作程序、数据记录与统计、判定规则,本标lfI适用于欧洲!tl樱桃品和"仙C'~曙a :. "，-，jj;:噎-副.1,2 规范性引用文件,凡是不注日期的引,NY/T 2594,NY/T 3056,3,3. 1,核心引,<1 叩,门口,据采集,3. 2,4,见附录A ,5 溶液配制,见附录B .,6 号物相关信息及使用,『唱~崔,核心引物名单及序列见附录C. 核心可 物相关信息见附录D,7 参照晶种及使用,参见I!付录D .,B 操作程序,8. 1 样品制备,J冽的版本适用于本文件,异扩增片段,每个品利1检测3 个单株，进行混样分听. 当一致性结果较差时， 进行单独l驭样分析,8. 2 DNA 提取与检测,采用CTAB 法。选取欧洲百It樱桃%JJ嫩III片或芳'(0 . 2 g 左右)在液氮中liIf磨至粉末，迅速将粉末移入,NY/T 3641-2020,2. 0 mL 离心笆，每管如l人700μ L 6 S 'C 预热的2 % CT八B 缓冲液， 轻挤混匀; 6 5'C 水浴30 min ，期间多次,颠倒混匀以确保充分裂仰。于4'C 12 000 g 离心10 min; Jj5(上消液，每笆'加入等体积的主主仿-异戊邸(2 4 ;,1)混合液， 充分混匀后， 12 000 g 离心1 0 min; Jj5(上消液到新的2 m L 离心包中，再加人1 mL -20'C 预冷,的异丙醇，颠倒混匀沉淀DNA ，并于一20'C 条卡 下放进30 m in 以上， 于4 'C 12 000g 离心1 5 min ，弃上消,液，用7 5% 乙醉浸泡消洗沉淀2 次， 风干，将沉淀物溶解于2 00 μL 灭菌超纯水中，使用核酸蛋白浓度测定,仪进行浓度测定， - 2 0'C 保存备用.,注. 以上为Ifl 荐的一种DNA 提取方法. 所获DNA 质iìl能够符合I'CR 扩增刊， 耍的DNAJM收方法部适用于本标削.,8.3 PCR 扩增,8. 3. 1 引物选择,选择附录C 中1 7 对引物进行检测.,8. 3. 2 反应体系,10μL 反应体系DNA 1μL( 3 0 nglμU 、lO X PCR 反应缓冲液(含Mg2+ )j I" L 、dNTP O. 8μ L (2 . S,mmo l/ U 、正反向可 物各O. 4 /-,L(10 /-,mol/U , T.叫酶O . 2μ L ( 5 Ul 1" L ) ，灭菌超纯7]( 6. 2 I"L ，在PCR tf,m仪上进行扭"T.~l 0,利用毛细岱也泳荧光检测时使用荧光标记的引物，寻 物的荧光染料种类参见附录D,注: 反应体系的体积可以根据具体的忻况进行调整.,8. 3. 3 反应程序,9 5 'C 预变性5 min; 9 5'C 变性30 s ， 5 7 'C 退火3 0 5 ， 72 'C延伸1 min ，共3 5 个循环;72 'C 下延伸1 0 min ,4 'C 保存,8. 4 PCR 产物检测,8. 4. 1 普通变性聚丙烯酸股凝胶电泳(Polyacrylamide gel electrophoresis , PAGE) 检jj[IJ,8. 4. 1. 1 清洗玻瑶板,将玻璃板m 洗干净， 用去离子水冲洗后l琼干。用无7]( 乙醉擦洗2 遍， 1吸水纸擦干。在长板上涂,0. 5 mL亲和l 硅炕工作液，带凹拙的短板上涂0 . 5 mL 剥离fili炕工作液。操作过程中防止2 块破硝板互,相污染,8. 4. 1.2 组装电泳板,待玻璃板彻底干燥后组装电泳板， 井，用水平仪调平,8.4. 1.3 制胶,在60 mL 6. 0% PAGE 1.庶液中分别!JII人600μ L 1 0% 的过硫股锁和6 0 I"L TEMED ，轻轻混匀后，泌,胶。illi JJ!……
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